BIOLOGÍA
PRIMERO DE BACHILLERATO
Microscopía
La microscopía es una técnica que usa microscopios para observar objetos y detalles demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. Los tipos principales son la microscopía óptica, que utiliza luz y lentes, y la electrónica, que emplea electrones para obtener imágenes de alta resolución. Es esencial en ciencia y medicina para estudiar células, tejidos y materiales a nivel microscópico.
Para poder observar y estudiar células o estructuras más pequeñas que una célula, debemos utilizar técnicas como la microscopía, la cual se clasifica en:
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Óptica
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Electrónica
ÓPTICA
Esta técnica se basa en la observación de las células y los tejidos por medio del microscopio óptico.
Este instrumento, ideado en el siglo XVII, abrió el camino de la investigación
celular gracias a los estudios realizados por Robert Hooke y otros contemporáneos
suyos.
El microscopio óptico se basa en la capacidad de la luz para atravesar superficies muy finas.
Contiene varias lentes que proporcionan un aumento de hasta 1500 veces y un poder de resolución de 200 nm (0,2 micras).
Elaboración de preparaciones
Fijación
Esta operación estabiliza los componentes celulares, con el objetivo de que su aspecto sea tan parecido como sea posible al del tejido vivo. Empleamos formaldehído, ácido acético y alcohol etílico.
Inclusión
Para hacer cortes finos de tejidos, que suelen ser blandos y frágiles, se utiliza una sustancia líquida, generalmente parafina, que se interpone entre los componentes del tejido y luego se solidifica, evitando así que el material se estropee.
Deshidratación
El agua debe ser eliminada de la muestra para facilitar las operaciones.
Para ello, sumergimos la muestra en diversos baños de alcohol de graduación creciente hasta llegar al alcohol absoluto, que produce una deshidratación total.
Corte
El corte de la muestra incluida en parafina y solidificada se realiza con un microtomo, obteniendo láminas muy finas de 1 a 25 μm de espesor que permiten el paso de la luz.
Montaje
Montamos los cortes en un portaobjetos y los cubrimos con xileno (o xilol) para eliminar el material de inclusión, dejando la muestra preparada para la aplicación de colorantes.
Tinción
Las células son transparentes e incoloras en su estado natural, por lo que son casi invisibles. Para hacerlas visibles como colorantes específicos que tiñen ciertos compartimentos celulares según las sustancias predominantes.
Conservación
Para conservar preparaciones, se sella el cubreobjetos con bálsamo del Canadá para evitar aire y putrefacción. La técnica del frotis se usa con líquidos como la sangre, extendiéndolos en un portaobjetos. Tras fijación, deshidratación y tinción, se puede observar sin cubreobjetos.
ELECTRÓNICA
La microscopía electrónica utiliza haces de electrones en lugar de luz. El microscopio electrónico de transmisión permite observar el interior de las células con gran detalle. Sustituir la luz por electrones proporciona una resolución de hasta 10 Å y aumentos de hasta un millón de veces, superando significativamente al microscopio óptico.
Funcionamiento
Los electrones se generan en un filamento de tungsteno, situado en la parte superior de un cilindro de unos dos metros de longitud. Para evitar la dispersión de electrones por colisiones con moléculas de aire, se mantiene un vacío en el interior del cilindro.
El ánodo tiene un pequeño orificio que, al ser atravesado por los electrones, produce un haz fino de electrones.
Los electrones son atraídos hacia una placa con carga positiva, el ánodo, mediante una diferencia de potencial aplicada entre el ánodo y el cátodo, lo que incrementa la energía cinética de los electrones.
Unas bobinas electromagnéticas actúan como lentes (condensadora, objetivo y de proyección) y enfocan el haz de electrones.
La muestra se coloca en el interior del cilindro. Al atravesarla, los electrones reducen su velocidad de manera diferente según las características de la muestra. Finalmente, los electrones inciden en una pantalla fluorescente, produciendo un punto luminoso cuya intensidad es proporcional a su velocidad.
